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目的：

通過實驗研宄，闡明朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響及作用機 制。

方法：

第1部分：朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響

• 朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響

條件性恐懼模型的復制：將實驗動物隨機分為空白對照組、模型對照組、給 藥組，每組10只。給藥組實驗動物給予朱砂安神丸混懸液（經(jīng)灌胃途徑給予，

• 81mg/g)，空白對照組、模型對照組均給予相同體積的雙蒸水，1次/曰，連續(xù) 7日。在末次給藥后，將模型對照組、給藥組實驗動物依次放入條件性恐懼刺激 箱內(nèi)，適應120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號(2000Hz，75dB)。 第125秒，在聲音信號的基礎上給予實驗動物持續(xù)5秒的不可逃避的足底電刺激 (0.75mA)。第130秒聲音信號與電刺激同時結束，130?190秒內(nèi)不做任何處理。 第190秒重復120?190秒過程，連續(xù)20次?？瞻讓φ战M僅給予聲音信號不給予 電刺激，其他操作相同。結束后讓實驗動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng) 籠。

恐懼記憶習得測試：復制條件性恐懼模型的次日，將各組實驗動物依次再放 入刺激箱內(nèi)，適應120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號（2000Hz， 75dB)。第130秒聲音信號結束，130?190秒內(nèi)不做任何處理，記錄聲音信號停 止后60秒內(nèi)實驗動物的值直反應時間。第190秒重復12CM90秒過程，連續(xù)5 次。結束后讓實驗動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng)籠。記錄各組實驗動 物的僵直反應時間，以此作為觀測指標探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記 憶習得的影響。

• 朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響

按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行

條件性恐懼模型的復制，在習得測試后的第1、3、5、7天，將各組實驗動物依 次再放入刺激箱內(nèi)，重復恐懼記憶習得測試的操作，記錄各組實驗動物的僵直反 應時間，以此作為觀測指標探宂朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影 響。

• 朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響

按上述“朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習得的影響”實驗方法進行

條件性恐懼模型的復制，在各組實驗動物進行條件性恐懼模型復制的次日，將各 組實驗動物放入大小鼠開場活動實驗箱內(nèi)，記錄各組實驗動物運動時間、運動距 離，以此探究朱砂安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響。

實驗儀器

條件性恐懼實驗監(jiān)測系統(tǒng)(上海欣軟信息科技有限公司，型號XR-XC404-2)， 條件性恐懼刺激箱包含隔音箱和刺激箱，隔音箱為670x650x700mm的斯金納箱, 可接入攝像頭、蜂鳴器、喇叭刺激器等模塊。實驗箱尺寸為300x300x400mm的 亞克力箱，前后壁透明，左右壁黑白相間，箱子底部為(p4mm不銹鋼棒，軸間距 為16mm的不銹鋼棒，可通0?5mA恒定電流；

條件性恐懼實驗分析系統(tǒng)（上海欣軟信息科技有限公司，型號：SuperFcs); 

實驗結果表明：模型對照組實驗動物PS幅值變化率顯著高于空白對照組， LTP出現(xiàn)異常的增強。這種突觸功能可塑性的改變可能與條件性恐懼刺激過程 中，海馬出現(xiàn)應激損傷有關。而給藥組實驗動物的PS幅值變化率顯著低于模型 對照組，與空白對照組更為接近。說明朱砂安神丸能夠下調(diào)海馬異常增強的LTP 7]C平，從而恢復了海馬LTP/LTD的正常調(diào)節(jié)。

LTP和LTD的誘導都依賴于NMDA受體，而受體激活后產(chǎn)生的是LTP還 是LTD，與突觸后膜Ca?濃度升高的水平有關。Ca²⁺濃度迅速的大幅度增加將誘 導LTP而適當程度的増加會誘導LTD。正常情況下NMDA與Glu結合后將突觸 前膜的電信號轉化成突觸后膜的Ca²⁺信號，使突觸后膜的Ca²⁺濃度升高，大量 的Ca²M乍為第二信使，可進一步激活生化級聯(lián)反應，從而改變突觸可塑性，產(chǎn)生 LTP。LTP產(chǎn)生后，突觸后膜的一些信使分子作用于突觸前膜，增強Glu的釋 放，維持LTP。但是，慢性應激增加海馬內(nèi)Glu含量，Glu與NMDA受體結合， 激活NMDA受體門控的Ca²⁺通道，引起Ca²⁺過度內(nèi)流，增強了 LTP, LTD受 到抑制，結果導致新的記憶不能與已有記憶整合，這可能是恐懼記憶難以消退的 機制之一。

綜上所述，本實驗確定了朱砂安神丸具有促進恐懼記憶消退的作用，其作用 機理可能是與其保護海馬神經(jīng)元，增強海馬突觸結構與功能可塑性相關。對于朱 砂安神丸是否能夠加強LTD，促進新記憶寫入己有記憶框架，需要通過測定給 藥后實驗動物LTD的情況進行實驗研究來驗證此假說。對于朱砂安神丸具體改 變海馬區(qū)哪些相關蛋白的表達也有待進一步研究證實。